脈沖式均質(zhì)器在食品微生物快速檢測中應(yīng)用研究

   隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人民對食品安全性的要求也日益提高，如何更快更好的檢測出食品能否放心食用就顯得尤為重要。微生物指標(biāo)是食品檢測中一個重要的指標(biāo)，而傳統(tǒng)的檢測方法操作準(zhǔn)備繁瑣且樣品前處理帶有一定的缺陷和局限性。為了提高檢測效率，微生物檢測可使用快速檢測方法?，F(xiàn)行上常用的快速檢測方法為使用快速測試片。由于測試片上含有冷水可溶性凝膠，因此無需傳統(tǒng)方法中傾倒瓊脂的步驟，從而避免了對細菌可能造成的熱損傷。相對于傳統(tǒng)平板檢測方法操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定，具有良好的實用性能，可大大簡化操作程序，提高檢測速度[1]。為了快速檢測方法能更好的開展，選擇適宜的樣品前處理的均質(zhì)方式可使檢測數(shù)據(jù)更真實可靠。本文通過研究新式的脈沖式均質(zhì)器與傳統(tǒng)的拍打式、旋轉(zhuǎn)攪拌式在使用效果上的差異，以得出使用脈沖式均質(zhì)器在食品微生物快速檢測中更優(yōu)的結(jié)論。

  一.材料

（1） 試驗材料

  美國3M公司細菌總數(shù)測試片，美國3M公司酵母菌/霉菌測試片，檢測樣品來源于市場隨機購買。

（2） 主要培養(yǎng)基

平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂、Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ)、亞硫酸鉍（BS）瓊脂。以上培養(yǎng)基均由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供。

（3） 主要儀器設(shè)備

ShockMixer-1 脈沖式樣品前處理器（環(huán)凱制造）、拍打式均質(zhì)器、攪拌式均質(zhì)器、振蕩器、高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺、電子天平、移液槍、生化培養(yǎng)箱。

（4） 菌株

大 腸 埃 希 菌 [CMCC（B）44102] 、金黃色葡萄球菌[CMCC26003]、福氏志賀氏菌[CMCC（B）51572]、乙型副傷寒沙門氏菌[CMCC51572]。以上菌種均由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供。

（5） 脈沖式均質(zhì)器的工作原理

通過高頻率震動內(nèi)裝食品樣品的膠袋，產(chǎn)生強烈沖擊波與高速攪動聯(lián)合作用，將食品中的微生物驅(qū)趕到樣品懸液中，形成菌濃度均勻的樣品稀釋液。減輕了對樣品的破壞，從而極大地減少了樣品碎片的產(chǎn)生。食品樣液澄清度高，能與快速檢測方法更配套。

 二.試驗方法

1.平板法

   脈沖式均質(zhì)器的操作步驟為，取一無菌袋打開置于天平上稱取25 g樣品，倒入所需225 mL無菌生理鹽水，置于脈沖均質(zhì)器的振蕩環(huán)中，脈沖時間設(shè)30 s，運行均質(zhì)。再分別依照GB/T4789.2-2010 ， GB4789.4-2010 ， GB/T4789.10-2010 ，GB/T4789.15-2010，GB/T4789.5-2003進行。

2.快速測試法

22.1 細菌總數(shù)快速測試片法

（1）利用脈沖均質(zhì)器把樣品制成1∶10的樣品勻液，按樣品的特性再進一步稀釋為1∶100，1∶1000等濃度的供試液。

（2）在平坦的實驗臺表面解開測試片的上層膜，用移液槍吸取1 mL樣品供試液，垂直滴加在測試片的中央。把上層膜蓋下或直接落下，但不可滾動上層膜。使用壓板隆起面底朝下，放置在上層膜中央，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。拿起壓板，靜置至少1 min以使培養(yǎng)基凝固。每個

樣品做2個平行試驗。

（3）測試片的透明面朝上，可堆疊至20片，水平置于培養(yǎng)箱內(nèi)

36±1 ℃培養(yǎng)48±2 h。

2.2.2 酵母菌霉菌快速測試片法

（1）樣品前處理同2.2.1（1）。

（2）測試片使用方法同2.2.1（2）。

（3）將測試片的透明面朝上，水平置于培養(yǎng)箱內(nèi)21~25 ℃培養(yǎng)3~5 d。

3 結(jié)果與討論

3.1 脈沖式均質(zhì)器對微生物的殺滅影響用現(xiàn)行國標(biāo)平板計數(shù)法分別檢測大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌的菌懸液。把各一定濃度的菌懸液分別以15 s、30 s、60 s、180 s 的脈沖時間處理，檢測脈沖波處理是否會對微生物生存造成不利影響，結(jié)果見表1。由實驗結(jié)果可見脈沖處理不影響大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌的生存，不對其構(gòu)成殺滅作用。

表1 脈沖前處理對標(biāo)準(zhǔn)菌株生存的影響

3.2 比較試驗

對市場上隨機購買的5個樣品分別采用脈沖式均質(zhì)器、拍打式均質(zhì)器與旋轉(zhuǎn)攪拌式均質(zhì)器進行前處理后利用微生物快速測試片，對檢品的菌落總數(shù)和霉菌進行快檢。同時用脈沖法前處理后的樣液做國標(biāo)的平板法，結(jié)果見表2。從表中可看出脈沖式前處理后，使用快速測試紙片法測菌落總數(shù)與霉菌的結(jié)果，與用脈沖式

前處理后用傳統(tǒng)的國標(biāo)平板法得出的數(shù)據(jù)相同，說明使用食品快速測試紙片測定菌落總數(shù)與霉菌的結(jié)果是可信的。而對比脈沖式、拍打式和旋轉(zhuǎn)攪拌式前處理的數(shù)據(jù)，可說明脈沖式的均質(zhì)效果更好，檢測數(shù)據(jù)更接近實際菌數(shù)。

4 結(jié)論

在市面上流通的食品，大部分都屬于快速消費品，因此提高此類快消品的微生物檢測速度和準(zhǔn)確度，對有效的保證食用人群的身體健康具有重要的意義。在微生物快速檢測中，采用快速測試片是常用的方法。此方法具有顯著的優(yōu)點：

*:減少培養(yǎng)基配制工作，可及時檢測，縮短準(zhǔn)備時間。

第二:在取樣時同時接種，結(jié)果更能反映當(dāng)時樣本中真實的細菌數(shù)。

第三:不需要大量的玻璃器皿，操作簡便；易于保存，便于運輸，工作量小。

避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復(fù)的缺陷。在食品的微生物快速檢測中，樣品前處理的好壞會影響快速檢測的準(zhǔn)確度。現(xiàn)時上比較新式的方法是使用脈沖式均質(zhì)器。這種方法優(yōu)于目前國內(nèi)普遍使用的拍打式和旋轉(zhuǎn)攪拌式均質(zhì)器。脈沖式前處理對食品中微生物無殺滅作用，通過與國標(biāo)方法對比，證實檢測效果良好，可以應(yīng)用于微生物快速檢驗工作中。脈沖式均質(zhì)器的優(yōu)點有：

*，減少食品碎片的產(chǎn)生，zui大限度地減少對一些快速檢驗方法的干擾因素。

第二，無需打碎樣品，不會導(dǎo)致樣品處理袋的破裂。

第三，樣品碎片較少，樣品液澄清，易于取樣，易于過濾，節(jié)省時間。

第四，的樣品處理方法微生物的釋放效果等同甚至優(yōu)于其他方法。世界上已有一些國家或組織批準(zhǔn)了這種方法，如標(biāo)準(zhǔn)化組織在《ISO7218：2007食品與飼料中微生物微生物學(xué)檢驗總的要求與指導(dǎo)》第三版5.4中，把脈沖均質(zhì)法列為三種儀器樣品均質(zhì)前處理方法之一[2]。因此，在微生物快速檢測中，使用脈沖式均質(zhì)器均質(zhì)可提高工作效率和減少檢測的干擾性，應(yīng)大力推廣應(yīng)用于食品微生物快速檢測前處理中。